Condition d'action d'une enzyme - SVT Dijon

Cinétique enzymatique et spécificité d'une enzyme On cherchera dans ce Tp à mesurer la vitesse d'une réaction chimique
catalysée par une enzyme (expériences 1 et 2) puis en mettre en évidence,
la spécificité enzyme/substrat (expériences 2 et 3).
La Glucose Oxydase D est une enzyme qui catalyse la réaction d'oxydation
du glucose D selon la réaction : Glucose + H2O +O2 ( Acide gluconique + H2O2
Puisqu'il y a disparition d'O2 du milieu au cours de la réaction, on pourra
suivre l'évolution de celle-ci grâce à un oxymètre. Protocole de mesures :
Expérience 1 :
(Mettre dans le réacteur environ 15 mL de solution de glucose à
1 g/L. (A prélever au bureau)
(Placer l'oxymètre. Afficher le vumètre.
(Attendre la stabilisation de la sonde et caler la sonde sur 18
% :
Etalonnage(oxymètre(calage(18 (caler maintenant.
(Lancer une acquisition sur 2 minutes.
(Au bout de 30 secondes, injecter 0,5 mL de la solution de GOD
à l'aide de la seringue. Vous placerez à ce moment un repère avec sa
légende à la fin de la prise de mesures. Expérience 2 :
Recommencez avec une solution de glucose 15 g/L
Attention : prenez bien soin de rincer soigneusement et de sécher
l'enceinte de mesure entre chaque manipulation. Expérience 3 :
Recommencez avec une solution de saccharose à 15 g/L.
Plan du compte rendu :
. Problème biologique ?
. Hypothèses.
. Principe.
. Présentation des résultats. Enregistrez vos résultats sur
la disquette (bureau) après les avoir légendé.
. Exploitation des résultats expérimentaux :
1. Commentez l'évolution, au cours du temps, de la
vitesse d'une des réaction.
2. Calculez la vitesse initiale de chaque réaction.
(Voir encadré)
3. Comparez les valeurs deux à deux puis concluez.
4. Faites un bilan en rappelant les propriétés
d'une enzyme mises en évidence au cours de ce
Tp. Vitesse d'une réaction enzymatique :
Calcul de la vitesse de la réaction enzymatique : elle correspond à
la vitesse de disparition d'un des substrats (ici l'O2).
V=[pic] cette valeur correspond à la pente de la courbe
étudiée.
Matériel nécessaire : condition d'action de la glucose oxydase.
8 postes EXAO Orphy :
- logiciel orphy
- sonde oxymétrique étalonnée
- boite de pellicule photo ou bioréacteur
- agitateur magnétique
- Potence avec pince
- 1 pissette d'eau distillée
- papier absorbant
- microseringue
- 5ml de solution de GOD
Préparation de la solution de GOD :
La GOD se présente sous la forme d'une poudre vendu chez
pierron. Les quantité de poudre nécessaires pour un tp sont très
faibles et difficiles à mesurer de façon précise.
Diluer une pointe de scalpel de GOD dans 10 mL d'eau distillée.
Cette solution se conserve au moins 7 jours au réfrigérateur.
La poudre se conserve plusieurs années au congélateur.
Au bureau :
- 500ml de glucose (1g/l)
- 500ml de glucose (15g/l)
- 500ml de saccharose (10g/l)
- 4 pipettes de 20ml + propipettes
- papier absorbant -----------------------
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