TP-TD juin 2000.doc
Les utilisations des enzymes de restriction sont très nombreuses en biologie
moléculaire. Par exemple, elles permettent de fractionner l'ADN en multiples
fragments susceptibles d'être séparés par les techniques d'électrophorèse. Les
enzymes de restriction peuvent être utilisées pour préparer un fragment d'ADN d'
un ...
Part of the document
UNIVERSITE DE RENNES 1 - UFR SVE Année Universitaire 1999-2000
DEUG SCIENCES (1ère année) : Sciences de la Vie (1ère Session d'examen)
Module UE4 (BIOLOGIE 2)
EPREUVE DE TRAVAUX PRATIQUES & TRAVAUX DIRIGES
N° d'anonymat : Partie Biologie et Génétique Cellulaire et Moléculaire (durée 1h10 ; 15
points) Vous répondrez aux questions directement sur ces feuilles dans les espaces
prévus à cet effet et vous les insèrerez dans une copie double à coin gommé
portant toutes les informations demandées. Vous n'oublierez pas de faire
figurer votre n° d'anonymat sur chaque feuille. Pour cette épreuve, aucun document, support de document ou support de
communication n'est autorisé. Exercice n°1 (Durée: 30 minutes) - 6 points Des chercheurs ont réalisé une coupe de foie de Pleurodèle qu'ils ont
colorée au VMP Question 1. Qu'est-ce que le VMP et à quoi sert-il? Question 2. Faites le schéma d'un noyau interphasique et de ses
constituants (soyez précis dans la légende). Question 3. Quels indices de l'activité transcriptionnelle de la cellule,
les chercheurs peuvent-ils observer sur cette coupe ?
Des chercheurs réalisent un fractionnement cellulaire à partir d'un foie
entier. Le foie d'un animal est récupéré et broyé dans un milieu
isotonique. L'extrait de broyage est filtré et le filtrat obtenu est soumis
à une première centrifugation de 600 g. Le culot contenant essentiellement
des noyaux est récupéré et le surnageant est centrifugé à 15000g (voir
figure ci-dessous). L'opération est répétée quatre fois afin d'isoler les
différents composants cellulaires. [pic]
Question 4. Comment s'appelle ce type de centrifugation ?
Question 5. Pourquoi tous les composants cellulaires ne sont pas tous
retrouvés dans le premier culot ? Question 6. Connaissez-vous une autre méthode pour séparer les organites
cellulaires par centrifugation ? Expliquez son principe.
Exercice n°2 (Durée 10 minutes) - 3 points Les figures présentées ci-dessous montrent quelques stades de la méiose
chez le criquet sud-américain Dichroplus silveira. Question 1. Déterminez le nombre haploïde de chromosomes de cette espèce.
Question 2. Appariez les chromosomes homologues. Le mâle est-il homo- ou
hétérogamétique (justifiez)?
| |[pic] |
| |Figure 2. |
| | |
|[pic] | |
| | |
| | |
| | |
|Fig. 1. Métaphase d'une | |
|spermatogonie (vue polaire) | | Question 3. A quelle phase de la méiose correspondent les clichés de la
figure 2 ?
Question 4. Classez ces figures dans l'ordre chronologique. Quel élément
vous permet de le faire ?. Question 5. Pourquoi ne trouve-t'on que 4 structures dans les figures 2A et
2B ? Qu'indique la flèche de la figure 2B ?
Exercice 3. (durée 30 minutes) - 6 points Un fragment d'ADN de 271 paires de bases (pb) présentant des sites BglII à
ses extrémités contient la séquence codante d'une protéine X impliquée dans
la longueur des canines. Le cadre de lecture ouvert est représenté par le
rectangle. [pic]
Question 1. Comment peut-on cloner ce fragment dans un plasmide qui ne
possède pas de site BglII mais présente le multisite de clonage suivant
(CarI - EcoRI - HindIII - BclI - SmaI - PstI ) justifiez ? [CarI : AGATC/T ; EcoRI : G/AATTC ; HindIII : A/AGCTT BclI : T/GATCA ; SmaI
: CCC/GGG ; PstI : CTGCA/G ; BglII : A/GATCT].
L'étude d'une pathologie rare appelée syndrome de "dracula" a montrée que
les personnes atteintes de cette maladie produisaient une protéine X plus
courte. Les séquences en acides aminés de la forme sauvage et de la forme
mutée correspondant à la zône noircie de la séquence sont les suivantes Protéine sauvage ----Leu - Val - Tyr - Ala - Phe - Trp - Ser ------ Protéine mutée ----Leu - Val - Tyr - Ala - Phe -COOH Question 2. Quelles sont les séquences d'ARN codant pour le domaine
polypeptidique sauvage ? Combien d'ARN peuvent-ils coder ce domaine ? Vous
disposez du tableau du code génétique. N° d'anonymat : Question 3. Sachant que la mutation qui conduit à la forme mutée de la
protéine correspond à une substitution et qu'elle provoque l'apparition
d'un site de restriction BclI dans la séquence, quelle est la séquence du
codon muté dans l'ADN du mutant ? Pouvez-vous déterminer la séquence du
codon Serine chez le sauvage ? Justifiez.
La masse moléculaire moyenne d'un acide aminé est de 110 daltons (Da).
Question 4. Quelle est la masse moléculaire (en daltons) de la protéine X
produite par un organisme sauvage ? Quelle est la masse de la protéine X
mutée sachant que la dernière base du codon Phe est la 151ème du fragment
d'ADN ?.justifiez vos résultats
[pic]