Exercices: numération et colimétrie

Exercices: numération et colimétrie
Exercice 1: comptage des colonies
Interpréter les résultats suivants (le type de micro-organisme recherché et l'aliment testé
ne sont pas pris en considération).
a) Dénombrement dans la masse, V = 1 mL
dilution10-210-310-4
Colonies165
14420
111
2
b) Dénombrement dans la masse, V = 1 mL
dilution10-010-110-2
Colonies18
132
00
0
c) Dénombrement en surface, V = 0,1 mL
dilution10-210-310-4
Colonies>300
>300>300 >300>300
>300
d) Dénombrement en surface V = 0,1 mL de l'échantillon ; l'échantillon est obtenu par
homogénéisation de 10g d'aliment dans 90 mL d'eau peptonée tamponnée ce qui constitue
la solution mère SM. Exprimer le résultat par mL d'échantillon puis par gramme d'aliment.
Dilution 10-110-210-3
Colonies>300
28826
362
6
Exercice 2: choix des dilutions de dilutions
Quelles dilutions choisir pour un dénombrement :
a) de la flore totale mésophile aérobie dans le lait ; dans la masse : 1 mL par boite ;
norme: N < 5.104 microorganismes.mL-1
b) de Staphylococcus aureus dans la viande hachée ; 0,1 mL étalés en surface ; 10g de
viande hachée sont broyés dans 90 ml d'eau peptonee pour obtenir une suspension mère :
N < 102
microorganismes.g-1
de viande
Exercice 3: dénombrement par la méthode du NPP
On réalise un dénombrement après culture en milieu liquide des conformes dans des
quenelles fraîches (NF ISO 4831 indice de classement V 08-016 de juillet 1991)
Le milieu utilisé est un bouillon tryptose + lactose + lauryl sulfate (détergent) : double et
simple concentration nommé milieu MLL, avec cloche de Durham.
La suspension mère (SM) est réalisée par broyage de 10g de quenelles dans 90 mL de
diluant.tryptone sel. Les ensemencements suivants sont réalisés :
Trois lots différents A, B et C sont testés
Milieu double
concentrationMilieu simple concentration
DilutionSuspension mèreSm10-210-3
10-4
Volume inoculé (mL)101111
Nombre de tubes33333
Résultas positifs lot A33320
Résultas positifs lot B31100
Résultas positifs lot C31300
Les tubes sont incubés 24h à 30°C.
1. Comment définir " pratiquement » un coliforme à l'aide de ce protocole ? qu' est ce
qu'un tube " positif », qu'est ce qu'un tube négatif ?
2. Quel est l'intérêt d'un milieu " double concentration » ?
3. Analyser les résultats ; Calculer la concentration en coliformes par gramme de quenelles
(utiliser la méthode du NPP) pour les différents lots.
Exercice 4: colimétrie en milieu solide
Un laboratoire vérifie la qualité microbiologique d'un pâté.
Pour les coliformes, la teneur maximum admissible est de 1000 par gramme.
Le protocole d'analyse est le suivant:
- pesée de 10 g à 0,1g près
- mise en suspension et broyage stérile dans 90 mL d'eau peptonée tamponnée
- dilution décimales jusqu'à 10-2
- Incorporation dans la masse d'un mL des dilutions testées.
Résultats :
Dilution de la solution
mère SM10-010-110-2
Colonies>300
>300113
1238
7
1. Quelle est l'allure d'une colonie suspecte d'être un coliforme ? Pourquoi n'est-on pas
certain que toutes les colonies suspectes sont des coliformes ?
2. Le pâté contient-il une seule espèce de bacilles gram - lactose + ?
3. Donner la concentration en coliformes présumés dans l'échantillon de pâté.
4. Pourquoi le laboratoire limite-il sa gamme de dilutions à 10-2 ?
5. Quelle est à votre avis la détectabilité théorique de la méthode ? Justifier