TP N°4 - Biotechno pour les profs

UNIVERSITE DE NOUAKCHOTTFACULTE DES SCIENCES ET TECHNIQUESDEPARTEMENT DE BIOLOGIEMANUEL DE TRAVAUX PRATIQUESDE MICROBIOLOGIE
BG2Par
Aminetou Bent MohamedAicha mint Sidi Baba
2007 - 20081
SOMMAIRETP. N° 1 - RÈGLES À SUIVRE DURANT LES TRAVAUX PRATIQUES DE
MICROBIOLOGIETP. N° 2 - LA STÉRILISATION
TP. N°3 - UTILISATION DES MILIEUX DE CULTURETP. N° 4 - EXAMEN MACROSCOPIQUE DES CULTURESTP. N° 5 - ISOLEMENT DE COLONIES PURESTP. N°6 - L'EXAMEN MICROSCOPIQUE DES BACTÉRIESTP. N°7 - EXAMEN APRÈS COLORATIONT P. N° 8 - COLORATION DIFFERENTIELLE DE GRAMTP. N° 9 - INFLUENCE DE LA VARIATION DE CERTAINS FACTEURS
PHYSIQUES SUR LA CROISSANCE DES MICROORGANISMESTP N° 10 - ETUDE DE LA SENSIBILITÉ AUX ANTIBIOTIQUES2
écouvillonAutoclave Boîtes de Pétri Flacon pour milieu de cultureBec Bunsengrattoir
Etuve
3
TP. N° 1. RÈGLES À SUIVRE DURANT LES TRAVAUX PRATIQUES DE
MICROBIOLOGIEOBJECTIFS :Se familiariser avec un laboratoire de microbiologie, son équipement et son fonctionnementl. Visite des locaux :
-Structure
-Présentation des gros matériels (étuves, autoclave, ... )2. Présentation d'un poste de travail :
-Matériels (bec bunsen, pipettes, verres, béchers anse, pinces lame,...),-Produits (eau, alcool, colorants divers,....)3. Les consignes de sécurité :
- Procéder à un lavage minutieux des mains, avec brossage des ongles avant et après
les manipulations, et avant toute sortie même momentanée de la salle de TP.- Éviter les ouvertures des fenêtres pendant les manipulations- Ouvrir avec précaution les récipients contenant des cultures microbiennes, afin
d'éviter toute projection.- Flamber, avant et après manipulations, les anses métalliques utilisées pour les
prélèvements, en commençant par chauffer la partie moyenne de l'instrument afin de
dessécher les restes de culture avant de porter l'extrémité dans la flamme, ceci pour éviter
toute projection.- Prévenir immédiatement le responsable de TP en cas de bris d'un récipient contenant
une culture en cas de contamination accidentelle d'un manipulateur ou tout incident dispersant
le matériel microbien.-Interdiction formelle de boire, manger et fumer pendant les TP -Stériliser tout le matériel septique à la fin de la manipulation-
-Prendre toutes dispositions indispensables pour la mise à l'abri des souches
microbiennes ainsi que leur destruction afin d'éviter toute contamination.4
4. Mise en évidence de la présence de micro-organismes au laboratoire1. Matériel : milieux gélosés en boite de Pétri, écouvillon, eau de robinet, cheveu, bec
Bunsen, pièce de monnaie.2. Mode opératoire :
Prendre 3 milieux gélosés en boite de Pétri :
- diviser la boite n°1 en 2 secteurs : déposer un cheveu sur le premier et quelques
gouttes d'eau du robinet sur le second.- diviser la boite n°2 en 4 secteurs : appliquer une trace de doigt sur le premier, refaire
l'opération sur le second après s'être lavé les mains, déposer une pièce de monnaie sur le
troisième, frotter un écouvillon sur la paillasse et appliquer celui-ci sur le dernier secteur.-laisser la troisième boite ouverte au dessus de la paillasse (environ 10 min).Remarque : une série de 5 boites de Pétri de 8cm de diamètre est laissée ouverte sur une
paillasse près d'un bec Bunsen allumé.A la fin de la manipulation, regrouper les différentes boites de Pétri et les placer à l'étuve à
37°C / 24 heures.
Remarque : pour éviter que l'eau de condensation dans les boîtes de Pétri perturbe la surface
du milieu gélosé, on place les boîtes en position retournée dans l'étuve.Poste de travail
Portoirs à tubesEau de
JavelVerre à pied+ instrumentsBec Bunsen
Zone d'air stérile5
TP. N : 2 - LA STÉRILISATIONLa stérilisation est l'opération qui consiste à éliminer les micro-organismes d'un objet,
et ce de manière durable. En microbiologie, le but de la stérilisation est d'une part de maîtriser
les micro-organismes introduits dans le milieu d'étude, et d'autre part d'éviter la contamination
du milieu extérieur et des personnes. Il existe deux grands moyens de Stérilisation : 1.La chaleur 2.La filtrationI. La stérilisation par la chaleurLa chaleur détruit les bactéries et les spores. On distingue les procédés à chaleur
" sèche » ou " humide ».
1. Chaleur sèche : a. Flambage : Le passage dans la flamme (bec BUNSEN) de la surface de
matériel non inflammable assure une parfaite stérilisation. On stérilise de cette
façon les fils de platine et les pipettes Pasteur.